اختبار كومبس هيليكس. أنواع وأسباب إجراء اختبار كومبس. علاج الانحرافات عن القاعدة

تمت الموافقة عليها بأمر من Roszdravnadzor

بشأن استخدام "مجموعة الكواشف لتحديد المستضدات والأجسام المضادة لنظام الريس في دم الإنسان"
(AGS لاختبار كومبس)

TU 9398-102-51203590-2012

RU No. RZN 2013/1255 بتاريخ 10/11/2013

I. مقدمة

يحتوي المصل القياسي لاختبار كومبس على أجسام مضادة مناعية غير متجانسة محددة ضد بروتين الدم البشري ، وهو مخصص للاستخدام في خيارين للتفاعل - اختبار كومبس المباشر وغير المباشر.

اختبار كومبس المباشرتستخدم لتحديد حساسية كريات الدم الحمراء في الجسم الحي في مرض الانحلالي لحديثي الولادة وفي المرضى الذين يعانون من شكل من أشكال المناعة الذاتية من فقر الدم الانحلالي المزمن ، وكذلك في بعض الحالات الأخرى. إجراء اختبار كومبس المباشريتكون من حقيقة أن مصل اختبار كومبس يضاف إلى كريات الدم الحمراء المدروسة ، والتي سبق غسلها من بروتينات البلازما الخاصة بها. إذا تم تحسس كريات الدم الحمراء في الجسم الحي ، فإن تراصها يحدث نتيجة التفاعل.

اختبار كومبس غير المباشريستخدم كاختبار للكشف عن حالة حساسية الجسم ، مما يسمح باكتشاف الأجسام المضادة الموجودة في حالة حرة في مصل دم الشخص الذي يتم فحصه ؛ كاختبار لتوافق الدم المنقول ، عند فحص تأثير مصل المستلم على كريات الدم الحمراء للمتبرع المقصود ؛ وكاختبار لتحديد مستضدات المجموعة المختلفة في كريات الدم الحمراء عن طريق التعرض الأولي لمصل معياري يحتوي على أجسام مضادة معروفة النوعية. اختبار كومبس غير المباشر (جميع المتغيرات) أنتجتعلى مرحلتين ، الأولى هي حضانة مصل الاختبار (أو القياسي) باستخدام كريات الدم الحمراء المعيارية (أو الاختبارية) ، أي توعية كريات الدم الحمراء في المختبر. المرحلة الثانية هي التفاعل الفعلي مع المصل لاختبار كومبس ، والذي يتم إجراؤه بنفس طريقة اختبار كومبس المباشر.

ترجع النتيجة النهائية للتفاعل في كل من كومبس المباشر وغير المباشر إلى تفاعل مصل الدم القياسي لاختبار كومبس ، مع الأجسام المضادة (بروتين الدم البشري) المثبتة على كريات الدم الحمراء. تتجلى هذه النتيجة في شكل تراص خلايا الدم الحمراء. لمراقبة التراص ، يجب استخدام البورسلين الأبيض أو أي لوح أبيض مع سطح مبلل ، بحيث تمتزج القطرات الموضوعة عليه جيدًا ولا تنتشر فوق سطح اللوحة. يجب تلطيخ القطرات المختلطة برفق على اللوحة ، بحيث يصل حجمها تقريبًا إلى حجم عملة 2 كوبيك.
ثانيًا. تحضير مكونات التفاعل

يتم الحصول على مصل الاختبار لتحديد وجود ونوعية الأجسام المضادة فيه من دم الشخص الذي تم فحصه دون إضافة مادة حافظة. يخزن في درجة حرارة + 4-8 0 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن يومين أو في حالة مجمدة - لمدة شهر واحد.

يتم الحصول على مصل اختبار التوافق بنفس الطريقة ، ولكن يتم استخدامه مع مدة صلاحية لا تزيد عن يومين.

يتم تحضير كريات الدم الحمراء المخصصة لتحديد بعض المتماثلات المتساوية فيها بنوع من المواد الحافظة من الشخص الذي يجري فحص دمه. يمكنك أيضًا استخدام رواسب من كريات الدم الحمراء مأخوذة من الدم بدون مادة حافظة.

عند اختبار التوافق ، يتم استخدام دم المتبرع ، ويتم إنزاله من خلال إبرة من قنينة معدة لنقل الدم.

في جميع الحالات ، يتم غسل كريات الدم الحمراء 3-4 مرات في أنابيب اختبار من البلازما عن طريق إضافة 8-10 أحجام من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى حجم واحد من كريات الدم الحمراء ، متبوعًا بالخلط والطرد المركزي عند 1500-2000 دورة في الدقيقة لمدة 5-10 دقائق (حتى ترسيب كرات الدم الحمراء الكامل). بعد كل عملية طرد مركزي ، يتم شفط المواد الزائدة عن الحاجة.
ثالثا. تقنية التفاعل

يتم تحضير كريات الدم الحمراء الاختبارية على شكل معلق 5٪ ، حيث يتم خلط قطرة واحدة من كريات الدم الحمراء المغسولة أربع مرات في أنبوب اختبار مع 19 قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم نقل قطرة واحدة (0.05 مل) من 5٪ من كرات الدم الحمراء المعلقة إلى صفيحة بيضاء ويتم تلطيخها. اهتزت اللوحة وخلال 3 دقائق لوحظ ما إذا كان قد حدث تراص كرات الدم الحمراء. إذا لم يحدث التراص ، يتم هنا إضافة قطرتين من المصل القياسي لاختبار كومبس ، ويتم خلط القطرات جيدًا ، وبعد ذلك تهتز اللوحة قليلاً ، ثم تُترك بمفردها لمدة دقيقة إلى دقيقتين ثم تهتز مرة أخرى. في نفس الوقت ، يتم مراقبة النتيجة لمدة 10 دقائق ، والتي يتم التعبير عنها في وجود أو عدم وجود تراص.
تفسير نتائج اختبار كومبس المباشر.

لا تراص - اختبار سلبي

وجود تراص - اختبار إيجابي ، والذي يشير إلى حساسية كريات الدم الحمراء المدروسة ، أي امتصاص الأجسام المضادة عليها التي حدثت في الجسم الحي في جسم الإنسان (حديثي الولادة ، مريض). إذا كان تراص كريات الدم الحمراء المدروسة جاء قبل الإضافةبالنسبة لهم مصل اختبار كومبس ، لا تؤخذ نتيجة الاختبار المباشر في الاعتبار.
2. اختبار كومبس غير المباشر

مصمم لاكتشاف الأجسام المضادة المتساوية في مصل دم الشخص الذي تم فحصه

يتم استخدامه في الحالات التي يكون من الضروري فيها معرفة ما إذا كان دم مريض ، أو امرأة حامل ، أو متبرع ، وما إلى ذلك يحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة المناعي المناعي ، ولإثبات خصوصيتها. للتفاعل ، يتم استخدام مصل دم الشخص الذي تم فحصه وكريات الدم الحمراء المعيارية ذات النوعية المعروفة. من بين 8-10 أو أكثر من عينات كريات الدم الحمراء ، يجب أن تكون هناك اختلافات في العوامل من الأنظمة الأخرى ، ومن المهم جدًا أن يتم احتواء كل من هذه العوامل في عينة واحدة على الأقل من كريات الدم الحمراء. تشتمل اللوحة أيضًا على عينات من كريات الدم الحمراء السالبة Rh مع مجموعات مختلفة من مستضدات أنظمة أخرى ، بحيث يكون من بينها Duffy-positive و Duffy-negative ، والتي بدورها ستقسم إلى Kell-positive و Kell-negative ، Kidd-positive و Kidd-negative ، إلخ. كعنصر تحكم سلبي ، إن أمكن ، يتم تضمين كريات الدم الحمراء للشخص الذي تتم دراسة مصله في التفاعل.

تقنية رد الفعل

يتم تثبيت عدد من أجهزة الطرد المركزي أو الأنابيب الأخرى بحجم 3-10 مل في رف ، وفقًا لعدد عينات كرات الدم الحمراء المتضمنة في التفاعل. يتم تمييز أنابيب الاختبار ، ووفقًا للوسم ، تتم إضافة قطرة صغيرة واحدة (0.01 مل) من كريات الدم الحمراء القياسية المغسولة إليها. تضاف ثلاث قطرات من مصل الاختبار إلى كل أنبوب ، وتهتز الأنابيب بقوة لخلط كريات الدم الحمراء مع المصل وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. بعد الحضانة ، تتم إزالة الأنابيب من منظم الحرارة ، ويتم غسل كريات الدم الحمراء عن طريق إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى الجزء العلوي من الأنبوب ، والخلط ، ثم الطرد المركزي. يتكرر الغسيل 3-4 مرات ، في كل مرة يتم فيها شفط السوائل الزائدة بعناية ، ثم تضاف قطرتان من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى كريات الدم الحمراء المغسولة للحصول على تعليق 5٪ تقريبًا (عند استخدام أنابيب الطرد المركزي ، يمكنك قصر نفسك على الغسيل مرتين) .

يتم نقل قطرة واحدة من 5٪ معلق من كريات الدم الحمراء من كل أنبوب إلى صفيحة بيضاء ، وتضاف قطرتان من مصل الدم القياسي لاختبار كومبس هناك ويخلط المصل جيدًا مع كريات الدم الحمراء. يتم رج الصفيحة قليلاً ، ثم تترك بمفردها لمدة 1-2 دقيقة ثم تهتز بشكل دوري مرة أخرى ، مع ملاحظة نتيجة التفاعل لمدة 20 دقيقة.

تفسير النتائج

لا توجد علامات تراص (نتيجة سلبية) في جميع العينات تعني أن مصل الاختبار لا يحتوي على أجسام مضادة غير كاملة لمجموعة المستضدات ، والتي توجد في كريات الدم الحمراء القياسية المدرجة في الدراسة.

إذا كان في بعض أو معظم القطرات ، بخلاف المجموعة الضابطة ، ملاحظ التلصيق ، وهذا يعني أن مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة غير كاملة ضد مستضدات كرات الدم الحمراء. يتم تحديد مسألة خصوصية هذه الأجسام المضادة من خلال مقارنة التفاعلات الإيجابية والسلبية مع التركيب المستضدي لكريات الدم الحمراء المتضمنة في التفاعل. يتم حل مسألة نشاط هذه الأجسام المضادة عن طريق المعايرة.

مثال 1حدث التراص مع جميع عينات كريات الدم الحمراء المحتوية على عامل Rh 0 (D) ، بغض النظر عن وجود وغياب عوامل أخرى لهذا النظام والأنظمة الأخرى ، بينما مع جميع عينات Rh 0 (D) السلبية ، لم يلاحظ التراص (بغض النظر عن ذلك) من وجود أو عدم وجود عوامل أخرى) - وهذا يعني أن مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة لمضاد Rhesus - Rh 0 (D).

مثال 2. حدث التراص مع جميع عينات كريات الدم الحمراء المحتوية على عامل دافي ، بغض النظر عن وجود أو عدم وجود مستضدات لنظام Rh والأنظمة الأخرى ، بينما لم يلاحظ أي تراص مع جميع عينات Duffy السلبية ، مما يعني أن المصل المدروس يحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة . - دافي.

إضافة.في حالة عدم وجود لوحة كاملة من كريات الدم الحمراء في المؤسسة ، ولكن هناك حاجة لاختبار المصل لوجود الأجسام المضادة ، فمن المستحسن إجراء دراسة مع 25-30 عينة عشوائية من كريات الدم الحمراء من الأفراد الأصحاء من المجموعة 0 (I) أو نفس الاسم مع مصل الاختبار. هذا سيجعل من الممكن حل مشكلة وجود أو عدم وجود الأجسام المضادة لمعظم مستضدات نظام Rh-Hr ، Duffy ، Kell ، Kidd.

عند الحصول على نتيجة إيجابية ، يمكن تحديد استنتاج آخر حول خصوصية الأجسام المضادة المكتشفة في دراسة خاصة مع لوحة كاملة من كريات الدم الحمراء القياسية.

3. تقنية إجراء اختبار كومبس غير المباشر كاختبار لمدى توافق الدم المنقول

لمنع عدم التوافق أثناء نقل الدم ، يجب إجراء اختبارات التوافق التالية قبل نقل الدم:

1. 
   اختبار توافق فصيلة الدم ABO ، والذي يتم إجراؤه على سطح مستوٍ في درجة حرارة الغرفة.
2. 
   اختبارات التوافق بواسطة عامل ال Rh و isoantigens الأخرى.

قد يعتمد عدم التوافق مع عامل Rh وبعض مضادات المتساوية الأخرى على وجود أجسام مضادة كاملة (يتم تحديدها في وسط ملحي عند 37 درجة مئوية في أنابيب الاختبار) ، وفي أغلب الأحيان ، على الأجسام المضادة غير المكتملة ، والتي يكون اختبار كومبس غير المباشر هو السبب فيها. الأكثر حساسية.

قطرة واحدة صغيرة (0.01 مل) من كريات الدم الحمراء من متبرع مغسول ، مأخوذة من خلال إبرة من قنينة دم مخصصة لنقل الدم ، يتم نقلها إلى قاع جهاز طرد مركزي أو أنبوب آخر بحجم 3-4 مل وتضاف 3 قطرات من مصل المريض إلى هو - هي. يتم رج الأنبوب لخلط كريات الدم الحمراء بالمصل ، ثم يوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. بعد الحضانة ، يضاف محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى الجزء العلوي من الأنبوب ، ويتم خلط محتويات الأنبوب وطرده لمدة 5-10 دقائق. يتكرر غسل كريات الدم الحمراء 3 مرات ، في كل مرة يتم إزالة التسريب بعناية. عند استخدام أنابيب الطرد المركزي ، يمكنك أن تقتصر على غسلتين. تضاف قطرتان من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى كريات الدم الحمراء المغسولة للحصول على ما يقرب من 5٪ معلق.

يتم نقل قطرة واحدة من تعليق 5٪ من كريات الدم الحمراء إلى صفيحة بيضاء ، وتضاف قطرتان من مصل الدم القياسي لاختبار كومبس هناك ويتم خلط المصل جيدًا مع كريات الدم الحمراء. ثم يتم اهتزاز الطبق قليلاً ، وتركه بمفرده لمدة 1-2 دقيقة ثم اهتزازه بشكل دوري مرة أخرى ، مع ملاحظة النتيجة لمدة 20 دقيقة.

ملحوظة:في حالة عدم توافق العامل الريصي ، يحدث التراص عادةً في غضون الدقيقة الأولى ، ولكن مع وجود عيار منخفض من الأجسام المضادة لـ Rh (أو الأجسام المضادة الأخرى) ، قد يحدث التراص لاحقًا ، أحيانًا بحلول الدقيقة العشرين.
تفسير النتيجة:

تتراكم مرئية في شكل كتل على خلفية واضحة أو مشوهة تمامًا - وهذا يعني دم المتبرع غير متوافقبدم المتلقي ولا يمكن نقله.

غياب علامات التراص تعني أن دم المريض لا يحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة لكريات الدم الحمراء للمتبرع فيما يتعلق بعامل الريسوس وغيره من المستضدات المتساوية التي يمكن أن تتكون لها أجسام مضادة غير كاملة.

اختبار كومبس غير المباشر حساس فقط للأجسام المضادة غير المكتملة.
4. أسلوب اختبار كومبس غير المباشر لتحديد التركيب المستضدي لكريات الدم الحمراء

يستخدم هذا الاختبار لتحديد وجود أو عدم وجود أي مستضد لمجموعة كرات الدم الحمراء باستخدام مصل قياسي يحتوي على الأجسام المضادة المقابلة في شكل غير كامل.

في أغلب الأحيان ، يستخدم اختبار كومبس غير المباشر لتحديد مستضدات Kell (K) و Duffy (Fy) و Kidd (Jk) وأيضًا لتحديد المستضد الضعيف لنظام Rh (Du).

قبل الشروع في تحديد المستضدات ، يجب اختبار كريات الدم الحمراء المدروسة في اختبار كومبس المباشر. مع نتيجة إيجابية للاختبار المباشر - تحديد المستضدات ، لا يمكن إجراء اختبار كومبس غير المباشر ، ويجب استخدام تفاعلات أخرى لهذا الغرض.

بالنسبة للتفاعل ، تُستخدم أجهزة الطرد المركزي أو أنابيب اختبار أخرى بحجم 3-4 مل بكمية ثلاثة: واحد لعينة اختبار كريات الدم الحمراء واثنان لكل قطرة صغيرة (0.01 مل) من كريات الدم الحمراء المغسولة ثلاث مرات. إلى الجزء السفلي من أنبوب الاختبار الأول ، تتم إضافة كريات الدم الحمراء للتحكم إلى الثاني ، والتي تحتوي على المستضد المطلوب (على سبيل المثال ، Duffy-positive) وفي أنبوب الاختبار الثالث - عنصر تحكم سلبي (Duffy-negative). أضف 2-3 قطرات من المصل القياسي (في هذا المثال ، أنتي دافي) لجميع الأنابيب. يتم رج الأنابيب لخلط المحتويات وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. بعد هذه الحضانة ، تتم إزالة الأنابيب من منظم الحرارة ، ويضاف إليها محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ويتم خلط المحتويات جيدًا وطردها عند 1500-2000 ألف دورة في الدقيقة لمدة 5-10 دقائق. بعد الطرد المركزي ، يتم استنشاق المادة الزائدة بعناية ويتم تكرار هذا الغسل للكريات الحمراء 4 مرات. (عند استخدام أنابيب الطرد المركزي ، يمكنك الاكتفاء بالغسيل مرتين).

تضاف قطرتان من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر إلى كريات الدم الحمراء المغسولة للحصول على ما يقرب من 5٪ معلق. يتم نقل قطرة واحدة من 5٪ معلق من كريات الدم الحمراء من كل أنبوب إلى صفيحة بيضاء ، وتضاف قطرتان من مصل الدم القياسي لاختبار كومبس إلى كل قطرة من كريات الدم الحمراء ويتم خلطها. اهتزت اللوحة قليلاً ، ثم تُترك بمفردها لمدة 1-2 دقيقة ثم اهتز بشكل دوري مرة أخرى ، مع ملاحظة مسار التفاعل لمدة 20 دقيقة.
تفسير النتائج

وجود تراص خلايا الدم الحمراء (موجبة) تعني أن الدم يحتوي على المستضد المطلوب (في هذا المثال ، يكون الدم موجبًا لدافي).

لا تراص (نتيجة سلبية) تعني أن الدم المختبَر لا يحتوي على المستضد المطلوب (دافي سلبي).

يتم احتساب النتيجة على أنها صحيحة بعد اختبار عينات التحكم ، أي في المثال مع نتيجة إيجابية مع عينة Duffy إيجابية ونتيجة سلبية مع عينة Duffy سلبية.

5. نموذج الإفراج

الكاشف متوفر في شكل سائل في قوارير 5 أو 10 مل (يحتوي 1 مل على 10 جرعات). يستخدم أزيد الصوديوم كمادة حافظة بتركيز نهائي 0.1٪.

6. التخزين

مدة الصلاحية - سنتان في الثلاجة عند 2-8 درجة مئوية. الزجاجة المفتوحة مناسبة للاستخدام عند تخزينها في الثلاجة في شكل مغلق بإحكام طوال فترة الصلاحية بأكملها.

أسباب الشكوى هي: قلة النشاط ، عدم الخصوصية ، انتهاك سلامة الزجاجة ، وجود رقائق ، كاشف منتهي الصلاحية. عند تقديم مطالبة ، يرجى تحديد تاريخ الاستلام والمورد (إذا تلقيت البضائع من جهة تصنيع مختلفة) ورقم الدفعة وأسباب اعتبار الكاشف غير مناسب. يرجى إرفاق بروتوكول بنتائج اختبار الكاشف و 2-3 زجاجات كاشف غير مفتوحة
يجب إرسال المطالبات إلى الشركة المصنعة "MEDIKLON": 127276

اختبار كومبس- تحليل للكشف عن الأجسام المضادة الملتصقة بالسطح أو المذابة في البلازما. بمساعدتها ، يتم الكشف عن التحصين والأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء. الاسم الثاني هو اختبار مضاد الجلوبيولين. يحدث بشكل مباشر وغير مباشر.

في اختبار مضاد الجلوبيولين المباشريكتشف الأجسام المضادة المثبتة على سطح كريات الدم الحمراء. يتم إجراؤه مع الاشتباه بأمراض المناعة الذاتية الأخرى بعد تناول الأدوية (ميثيل دوبا ، البنسلين ، الكينين) و.

تم تحسس كريات الدم الحمراء في الجسم الحي - ترتبط الأجسام المضادة بها بقوة بالفعل ، وإضافة مصل مضاد الجلوبيولين (مضاد IgG) يتسبب في التصاق الخلايا الحساسة ببعضها البعض ، وهو ما يمكن رؤيته بالعين المجردة.

اختبار كومبس غير المباشريكتشف الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء في بلازما الدم ، ويتم إجراؤه قبل نقل الدم وأثناءه.

الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء - نوع من الأجسام المضادة الذاتية ، أي الأجسام المضادة ضد أنسجتها. يحدث الجسم المضاد الذاتي عندما يتفاعل الجهاز المناعي بشكل غير طبيعي مع بعض الأدوية ، مثل الجرعات العالية من البنسلين.

تحتوي كريات الدم الحمراء الموجودة على سطحها على تركيبات كيميائية مختلفة (جليكوليبيدات ، سكريات ، بروتينات سكرية وبروتينات) ، والتي تسمى مستضدات في الطب. يرث الشخص من والديه خريطة معينة من المستضدات على كل خلية دم حمراء.

يتم دمج المستضدات في مجموعات وبجانب ذلك ، يتم تقسيم الدم إلى عدة مجموعات - وفقًا لنظام AB0 ، Rh ، Kell ، Lewis ، Kidd ، Duffy. أشهرها وأهمها في عمل الطبيب هما AB0 و Rh (Rh).

نظام AB0

يتحدد انتماء العامل الريصي للفرد من خلال وجود هذه المستضدات. مستضد كريات الدم الحمراء المهم بشكل خاص هو المستضد D. إذا كان موجودًا ، فعندئذ يتحدثون عنه RhD للدم الموجب Rh، وإذا لم يكن - حول Rh سالب Rhd.

إذا انضم الجسم المضاد المقابل إلى مستضدات كريات الدم الحمراء ، فسيتم تدمير كريات الدم الحمراء - سيكون هناك انحلال الدم.

دواعي الإستعمال

المؤشر الرئيسي ل مباشرةاختبار مضاد الجلوبيولين- اشتباه في الإصابة بفقر الدم الانحلالي. غالبًا ما يتم إجراؤه مع فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الأولي ، وانحلال الدم مع الروماتيزم ، والورم ، أمراض معديةانحلال الدم الناجم عن المخدرات.

إذا ظهر فقر الدم بعد بضعة أيام أو أشهر من نقل الدم أو مع اليرقان لفترات طويلة عند حديثي الولادة ، يتم أيضًا إجراء اختبار كومبس المباشر.

غير مباشرتم إجراء اختبار مضاد الجلوبيولينقبل نقل الدم وأثناء الحمل لامرأة سلبية عامل ريزوس.

فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية

فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية (أولي)هو مرض مناعي ذاتي تقليدي لأسباب غير معروفة. يتم تعطيل التفاعل داخل الجهاز المناعي ، مما يؤدي إلى تصور كريات الدم الحمراء على أنها غريبة. في العقد الليمفاوية ، يتم تصنيع الأجسام المضادة من فئة IgG (تتفاعل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية) و / أو IgM (عند درجة حرارة 40 درجة مئوية) ، والتي ، عند توصيلها بسطح كريات الدم الحمراء ، تبدأ عددًا من الإنزيمات ( النظام التكميلي) و "تثقيب" جدار كرات الدم الحمراء ، مما يؤدي إلى تدميره - انحلال الدم.

ترجع الأعراض الأولى إلى كل من تدمير خلايا الدم الحمراء وانخفاض الهيموجلوبين. بينهم:

• التعب والضعف العام والتهيج
• ضيق التنفس
• آلام في البطن والصدر والغثيان
• لون البول غامق
• ألم في الظهر
• تلوين إيقاعي للجلد والأغشية المخاطية
• انخفاض في عدد كريات الدم الحمراء و

نتيجة إيجابية مباشرة اختبار كومبس 100٪ يؤكد تشخيص فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية ، مما يثبت مصدره من المناعة الذاتية. في الوقت نفسه ، لا تجعل النتيجة السلبية من الممكن إزالة التشخيص.

فقر الدم الانحلالي الثانوي

يمكن أن يكون فقر الدم الانحلالي الثانوي للمناعة الذاتية واختبار كومبس الإيجابي مع الأمراض التالية:

• متلازمة إيفانز
• عدوى الالتهاب الرئوي

يعد الاختبار الإيجابي لمضادات الغلوبولين في هذه الأمراض أحد الأعراض وليس معيارًا تشخيصيًا.

مرض انحلالي حديثي الولادة

سبب مرض انحلالي لحديثي الولادةعدم توافق فصيلة الدم في الأم والجنين ، في معظم الحالات وفقًا لنظام Rh ، في حالات فردية - وفقًا لنظام AB0 ، عرضيًا - وفقًا لمولدات المضادات الأخرى.

يتطور تضارب العامل الريصي إذا كان الجنين في المرأة التي تحمل عامل ريسس (Rh) قد ورث دمًا إيجابيًا من والدها.

يتطور المرض عند الوليد فقط إذا كانت الأم قد طورت بالفعل أجسامًا مضادة للمستضدات المقابلة ، والتي تحدث بعد حالات الحمل السابقة والإجهاض وعمليات نقل الدم غير المتوافق. السبب الأكثر شيوعًا لتحفيز تخليق الأجسام المضادة لمستضدات غشاء كرات الدم الحمراء هو الولادة (نزيف الجنين والأم). تمر الولادات الأولى بشكل عام دون مضاعفات ، ولكن الولادات اللاحقة محفوفة بمرض انحلال الوليد في الأيام الأولى بعد الولادة.

أعراض مرض الانحلالي عند الوليد:

• اصفرار الجلد
• ، والغشاء المخاطي
• تضخم الكبد والطحال
• اضطرابات في الجهاز التنفسي
• انتفاخ الجسم كله
• الإثارة والاكتئاب التدريجي للجهاز العصبي المركزي

فقر الدم بعد نقل الدم

اختبار كومبس غير المباشرأجريت قبل نقل الدم لتقييم التوافق ، واختبار كومبس المباشر - بعده في حالة الاشتباه في حدوث انحلال دم بعد نقل الدم ، أي إذا كنت تعاني من أعراض مثل الحمى والري (اقرأ أدناه). الغرض من الاختبار هو الكشف عن الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء المنقولة التي ارتبطت بكرات الدم الحمراء للمتلقي وهي سبب انحلال الدم بعد نقل الدم ، بالإضافة إلى الإزالة المبكرة لكرات الدم الحمراء من مجرى الدم للمتلقي (الشخص الذي حصل على دم).

أعراض:

• زيادة في درجة حرارة الجسم
• طفح جلدي على الجلد
• ألم في الظهر
• أحمر
• غثيان
• دوخة

فك التشفير

تجدر الإشارة إلى أن القواعد الأساسية لفك تشفير اختبارات مضادات الغلوبولين المباشرة وغير المباشرة هي نفسها. الاختلاف الوحيد هو موقع الأجسام المضادة - في الدم أو بالفعل على كريات الدم الحمراء.

• إذا اختبار كومبس المباشر سلبي- هذا يعني أن الجسم المضاد لا "يجلس" على كريات الدم الحمراء ويجب البحث عن سبب الأعراض أكثر ويجب إجراء اختبار كومبس غير المباشر
• إذا تم الكشف عن نتيجة إيجابية لاختبار كومبس بعد نقل الدم ، والالتهابات ، والأدوية - تستمر الإيجابية حتى 3 أشهر (عمر كريات الدم الحمراء 120 يومًا - 3 أشهر)
• ينتج عن اختبار مضاد الغلوبولين الإيجابي مرض مناعي ذاتي يستمر لأشهر وحتى سنوات

معيار

• اختبار كومبس المباشر - سلبي
• اختبار كومبس غير المباشر - سلبي

من الناحية النوعية ، يتم قياس النتيجة الإيجابية في عدد الإيجابيات من واحد إلى أربعة (+ ، ++ ، +++ ، ++++) ، وكميًا في شكل رقمي - 1:16 ، 1: 256 ، إلخ.

نعم. يجب أن يعلم طبيبك أنك قد تلقيت نقل دم ، لأنه يؤثر على التفسير الصحيح لنتائج الاختبار الآن. عند تلقي دم شخص آخر (وإن تم اختباره عدة مرات) ، هناك دائمًا احتمال أن يطور جسمك أجسامًا مضادة ضد الدم المنقول. هذه الأجسام المضادة سيكون لها تأثير سلبي على الصحة. مع عمليات نقل الدم اللاحقة ، يجب أن يعلم الطبيب أنك قد تلقيت بالفعل عمليات نقل ، مما يعني أنه كان هناك وقت لتخليق الأجسام المضادة. بالنسبة للنساء الحوامل ، هذه المعلومات أكثر صلة.

3. إذا كان هناك عدم تطابق في عامل ال Rh بين الأم والطفل ، فهل سيمرض جميع الأطفال؟

يعتمد على ما إذا كان الطفل هو العامل الريصي موجبًا أم سلبيًا (RhD). يمكن أن تكون ناقلات فصائل الدم الأول والثاني والثالث والرابع إيجابية وسلبية على حد سواء. في الحالة التي تكون فيها الأم سلبية العامل الريصي والطفل إيجابي عامل ريسس ، سيتم إنتاج الأجسام المضادة بالفعل مع الحمل الأول ، ولكن فقط بعد الولادة الأولى (أو إنهاء الحمل) سيكون هناك اتصال مباشر بين دم الطفل. الأم والطفل. سيكون تنفيذ التأثير الانحلالي للأجسام المضادة فقط في الولادات الثانية واللاحقة ، مما سيؤدي إلى مرض انحلالي عند الوليد.

يجب فحص كل امرأة لديها عامل ريسس سلبي بعناية أثناء الحمل ، وبعد الولادة ، يتم إجراء العلاج الوقائي لمنع ظهور الأجسام المضادة ومضاعفات أخرى.

4. أثناء الحمل هل من الضروري معرفة فصيلة دم الزوج قبل إجراء فحص كومبس؟

من الضروري ليس فقط معرفة ، ولكن أيضًا التحقق من فصيلة دم الأب البيولوجي للطفل أثناء الحمل.

حقائق

• تم اقتراحه لأول مرة في كامبريدج عام 1945
• عتبة الحساسية - ما لا يقل عن 300 جزيء ثابت من الجسم المضاد في خلية حمراء واحدة
• عدد الأجسام المضادة التي تسبب انحلال الدم - بشكل فردي لكل شخص (من 16-30 إلى 300)
• قد يتم تطبيع ديناميكيات المؤشرات المختبرية الأخرى لفقر الدم الانحلالي (الهيموغلوبين ، والبيليروبين ، والخلايا الشبكية) ، وسيظل اختبار كومبس على نفس المستوى

آخر تعديل لاختبار كومبس: 16 مارس 2018 بحلول ماريا بوديان

يوجد على سطح كريات الدم الحمراء عدد كبير من المستضدات. اعتمادًا على نوع هذه المستضدات ، يتم تمييز مجموعات الدم ، وأكثر المجموعات المدروسة هي ABO و Rh و Kell و Duffy وغيرها الكثير.

متوسط ​​السعر في منطقتك: 2645 من 2645 ... إلى 2645

1 المختبرات تقوم بإجراء هذا التحليل في منطقتك

وصف الدراسة

التحضير للدراسة:يؤخذ الدم من الوريد ثم يتم الحصول على المصل (بلازما الدم بدون الفيبرينوجين) عن طريق التخثر الطبيعي أو عن طريق ترسيب الفيبرينوجين. المواد قيد الدراسة:أخذ الدم

يوجد على سطح كريات الدم الحمراء عدد كبير من المستضدات. اعتمادًا على نوع هذه المستضدات ، يتم تمييز مجموعات الدم ، وأكثر المجموعات التي تمت دراستها هي ABO و Rh و Kell و Duffy والعديد من الأنظمة الأخرى. عادة ، توجد أجسام مضادة لمولدات المضادات من فصيلة أخرى في الدم ، ولكن أثناء نقل الدم ، والحمل ، وأمراض المناعة الذاتية ، وما إلى ذلك ، يتم العثور على الأجسام المضادة لمضاداتها.

طريقة

يعتمد تفاعل كومبس غير المباشر على الكشف عن تراص (تكتل) كريات الدم الحمراء ، التي تحتوي على أجسام مضادة غير مكتملة على السطح ، والتي تظهر عند إضافة مصل مضاد الجلوبيولين.

في المرحلة الأولى ، يتم إضافة كريات الدم الحمراء المانحة (O (I) ، Rh +) ومصل الاختبار إلى أنبوب اختبار واحد. إذا كانت الأجسام المضادة غير الكاملة للكريات الحمراء موجودة في مصل الاختبار ، فعندئذٍ يتم تثبيتها على سطح كريات الدم الحمراء المانحة.

في المرحلة الثانية ، يتم وضع كريات الدم الحمراء المانحة مع الأجسام المضادة (إن وجدت) ومصل مضاد الجلوبيولين القياسي مع الأجسام المضادة للجلوبيولين المناعي البشري على الزجاج. إذا تم ، في المرحلة الأولى ، تثبيت الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء على سطح كريات الدم الحمراء ، فعند إضافة المصل القياسي ، تلتصق كريات الدم الحمراء معًا بسبب تفاعل الأجسام المضادة.

القيم المرجعية - القاعدة
(تفاعل كومبس غير المباشر (اختبار مضاد الغلوبولين ، الكشف عن الأجسام المضادة غير الكاملة لكريات الدم الحمراء) ، الدم)

قد تختلف المعلومات المتعلقة بالقيم المرجعية للمؤشرات ، فضلاً عن تكوين المؤشرات المضمنة في التحليل ، اختلافًا طفيفًا اعتمادًا على المختبر!

معيار:

عادة ، لا ينبغي أن يكون هناك أجسام مضادة لكريات الدم الحمراء ؛ عند ضبط تفاعل كومبس ، لا يحدث تجمع كرات الدم الحمراء.

دواعي الإستعمال

دراسة المناعة الخلطية النوعية في حالة الاشتباه تفاعلات المناعة الذاتيةفي الجسم ، صراع ريسس بين الأم والجنين ، تحديد توافق دم المتبرع والمتلقي

زيادة القيم (نتيجة إيجابية)

تم العثور على الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء عندما:

1. فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية

2. مرض انحلالي حديثي الولادة

3. أمراض جهازيةالنسيج الضام

4. التهاب الكبد المزمن النشط ، إلخ.

الأجسام المضادةتقع على سطح كريات الدم الحمراء ، ويمكن أن تكون في حالة ثابتة وحرة في بلازما الدم. اعتمادًا على حالة الأجسام المضادة ، يتم إجراء تفاعل كومبس المباشر أو غير المباشر. إذا كان هناك سبب للاعتقاد بأن الأجسام المضادة مثبتة على سطح خلايا الدم الحمراء ، يتم إجراء اختبار كومبس المباشر. في هذه الحالة ، يمر الاختبار في مرحلة واحدة - يضاف مصل مضاد الجلوبيولين. في حالة وجود أجسام مضادة غير مكتملة على سطح خلايا الدم الحمراء ، التلصيقكريات الدم الحمراء.

رد فعل غير مباشر

يستمر تفاعل كومبس غير المباشر في خطوتين. أولا ، من الضروري التنفيذ بشكل مصطنع توعيةكريات الدم الحمراء. للقيام بذلك ، يتم تحضين كريات الدم الحمراء ومصل الدم قيد الدراسة ، مما يتسبب في تثبيت الأجسام المضادة على سطح كريات الدم الحمراء. بعد ذلك ، يتم إجراء المرحلة الثانية من اختبار كومبس - إضافة مصل مضاد الجلوبيولين.

معادلة الترسيب - RP (من Lat praecipilo إلى الترسيب) هو تكوين وترسيب مركب من مستضد جزيئي قابل للذوبان مع أجسام مضادة في شكل تعكر ، يسمى ترسب. يتكون عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات متساوية ، فائض واحد منهم يقلل من مستوى تكوين المركب المناعي. يتم وضع تفاعل الترسيب في أنابيب الاختبار (تفاعل الترسيب الدائري) ، في المواد الهلامية ، ووسط المغذيات ، وما إلى ذلك. يتم استخدام أنواع مختلفة من تفاعلات الترسيب في هلام شبه سائل من أجار أو الاغاروز على نطاق واسع ، والانتشار المناعي المزدوج وفقًا لـ Ouchterlony ، الانتشار المناعي الراديوم ، الرحلان المناعيوإلخ.

رد فعل حلقة هطول الأمطار. يتم إجراء التفاعل في أنابيب ترسيب ضيقة: يتم وضع مستضد قابل للذوبان على مصل المناعة. مع النسبة المثلى للمستضد والأجسام المضادة ، يتم تكوين طبقة معتمة عند حدود هذين المحلين. حلقة مترسبة. إذا تم استخدام مستخلصات الأنسجة المغلية والمفلترة كمستضدات في التفاعل ، فإن هذا التفاعل يسمى تفاعل I- ترسيب حراري (تفاعل يتم فيه اكتشاف الجمرة الخبيثة).
رد فعل الانتشار المناعي المزدوج Ouchterlony. لإعداد التفاعل ، يُسكب هلام الأجار المذاب في طبقة رقيقة على لوح زجاجي ، وبعد التصلب ، يتم قطع ثقوب فيه. يتم وضع المستضدات والأمصال المناعية بشكل منفصل في آبار الهلام ، والتي تنتشر تجاه بعضها البعض. عند نقطة الالتقاء بنسب مكافئة ، فإنها تشكل راسبًا على شكل شريط أبيض. في الأنظمة متعددة المكونات ، تظهر عدة خطوط من الرواسب بين الآبار مع المستضدات والأجسام المضادة ؛ في AGs متطابقة ، تندمج الخطوط المترسبة ؛ في AGs غير المتطابقة ، فإنها تتقاطع.
رد فعل الانتشار المناعي الشعاعي.يُسكب المصل المناعي مع هلام الأجار المنصهر بالتساوي على الزجاج. بعد التصلب في الهلام ، يتم عمل الآبار التي يتم فيها وضع المستضد في تخفيفات مختلفة. ينتشر المستضد في الهلام ، ويشكل مناطق ترسيب حلقي حول الآبار مع الأجسام المضادة. يتناسب قطر حلقة الترسيب مع تركيز المستضد. يتم استخدام التفاعل لتحديد الغلوبولينات المناعية في الدم من مختلف الفئات ، ومكونات النظام التكميلي ، إلخ.
الرحلان المناعي- مزيج من طريقة الرحلان الكهربي والترسيب المناعي: يتم إدخال مزيج من المستضدات في آبار الجل ويفصل في الهلام باستخدام الرحلان الكهربي ، ثم يتم إدخال المصل المناعي في الأخدود الموازي لمناطق الرحلان الكهربائي ، والتي تنتشر الأجسام المضادة فيها الهلام وتشكيل خط ترسيب في موقع "الاجتماع" مع مولد الضد.
تفاعل التندف(وفقًا لرامون) (من خط الطول f1oecus - رقائق الصوف) - ظهور براق أو كتلة قشارية (ترسيب مناعي) في أنبوب اختبار أثناء تفاعل السم - مضاد السم أو الذيفان - مضاد السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو الذيفانات.

كتابة HLA- دراسة معقد التوافق النسيجي البشري الرئيسي - مركب HLA. يتضمن هذا التكوين منطقة من الجينات الموجودة على الكروموسوم 6 تقوم بتشفير مستضدات HLA المشاركة في الاستجابات المناعية المختلفة.

المهام في كتابة HLAيمكن أن يكون مختلفًا تمامًا - التعريف البيولوجي (نوع HLA موروث جنبًا إلى جنب مع الجينات الأبوية) ، وتحديد الاستعداد ل امراض عديدة، واختيار المتبرعين لزرع الأعضاء - في هذه الحالة ، تتم مقارنة نتائج نوع HLA لأنسجة المتبرع والمتلقي. بمساعدة كتابة HLA ، يتم تحديد مدى تشابه أو اختلاف الأزواج من حيث مستضدات توافق الأنسجة من أجل تشخيص حالات العقم.

تقترح كتابة HLA تحليل تعدد الأشكال HLAويتم تنفيذه بطريقتين - وراثية مصلية وجزيئية. تعتمد الطريقة المصلية الكلاسيكية لنوع HLA على اختبار السمية الدقيقة للخلايا ، بينما تستخدم الطريقة الجزيئية PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل).

المصلي كتابة HLAأجريت على مجموعات الخلايا المعزولة. يتم حمل مستضدات التوافق النسيجي الرئيسية بشكل رئيسي بواسطة الخلايا الليمفاوية. لذلك ، يتم استخدام تعليق الخلايا الليمفاوية التائية كناقلات رئيسية لمستضدات الصنف الأول ، وتعليق الخلايا الليمفاوية B لتحديد مستضدات الصنف الثاني من HLA. يتم استخدام إما الطرد المركزي أو الفصل المناعي المغناطيسي لعزل مجموعات الخلايا المرغوبة من الدم الكامل. يُعتقد أن الطريقة الأولى يمكن أن تؤدي إلى بيانات إيجابية خاطئة ، حيث تموت بعض الخلايا في هذه الحالة. يتم التعرف على الطريقة الثانية على أنها أكثر تحديدًا - بينما تظل أكثر من 95 ٪ من الخلايا قابلة للحياة.

لكن الأساس لإجراء اختبار السمية اللمفاوية كتابة HLAهو مصل محدد يحتوي على أجسام مضادة لمختلف أنواع الأليلات من مستضدات HLA من الصنفين الأول والثاني. يسمح لك الاختبار المصلي بتحديد نوع HLA من خلال فحص أي من المصل يتفاعل مع الخلايا الليمفاوية وأي منها لا يتفاعل.

في حالة حدوث تفاعل بين الخلايا والمصل ، يتم تكوين مركب مستضد - جسم مضاد على سطح الخلية. بعد إضافة محلول يحتوي على مكمل ، يحدث تحلل وموت الخلايا. يتم تقييم الاختبار المصلي لنوع HLA باستخدام الفحص المجهري الفلوري لتقييم التفاعلات الإيجابية (الفلورية الحمراء) والسلبية (التألق الأخضر) ، أو الفحص المجهري الطوري لتلطيخ نوى الخلايا الميتة. يتم اشتقاق نتيجة تصنيف HLA مع الأخذ في الاعتبار خصوصية الأمصال المتفاعلة ومجموعات المستضدات المتفاعلة ، وشدة تفاعل السمية الخلوية.

مساوئ السيرولوجية كتابة HLAهي وجود تفاعلات متصالبة ، ضعف تقارب الجسم المضاد أو تعبير منخفض عن مستضدات HLA ، عدم وجود منتجات بروتينية في عدد من جينات HLA.

طرق جزيئية أكثر حداثة كتابة HLAيتم استخدام عينات تركيبية موحدة بالفعل ، والتي لا تتفاعل مع المستضدات الموجودة على سطح الكريات البيض ، ولكن مع الحمض النووي وتشير مباشرة إلى المستضدات الموجودة في العينة. لا تتطلب الطرق الجزيئية كريات الدم البيضاء الحية ، ويمكن دراسة أي خلية بشرية ، وتكفي بضعة ميكرولترات من الدم للعمل ، أو يمكن أن تقتصر على كشط الغشاء المخاطي للفم.

الجينات الجزيئية كتابة HLAيستخدم طريقة PCR ، والخطوة الأولى منها هي الحصول على الحمض النووي الجيني النقي (من الدم الكامل ، تعليق الكريات البيض ، الأنسجة).

ثم يتم نسخ عينة الحمض النووي - تضخيمها في أنبوب اختبار باستخدام مواد أولية (DNA قصيرة أحادية الجديلة) خاصة بموضع HLA محدد. يجب أن تكون نهايات كل زوج تمهيدي مكملة تمامًا لتسلسل فريد يتوافق مع أليل معين ، وإلا فلن يحدث تضخيم.

بعد PCR ، أثناء النسخ المتكرر ، يتم الحصول على عدد كبير من شظايا الحمض النووي ، والتي يمكن تقييمها بصريًا. للقيام بذلك ، تخضع مخاليط التفاعل للتحليل الكهربائي أو التهجين ، ويتم تحديد ما إذا كان قد حدث تضخيم معين باستخدام برنامج أو جدول. يتم تقديم نتيجة كتابة HLA في شكل تقرير شامل على مستوى الجينات والأليلات. بسبب توحيد العينات المستخدمة الجزيئية كتابة HLAبمزيد من الدقة المصلية. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يوفر مزيدًا من المعلومات (المزيد من أليلات الحمض النووي الجديدة) ومستوى أعلى من التفاصيل ، لأنه يسمح لك بتحديد ليس فقط المستضدات ، ولكن أيضًا الأليلات نفسها ، والتي تحدد المستضد الموجود في الخلية.

تفاعل تحلل المناعة.يعتمد التفاعل على قدرة الأجسام المضادة المحددة على تكوين مجمعات مناعية مع الخلايا ، بما في ذلك كريات الدم الحمراء والبكتيريا ، مما يؤدي إلى تنشيط النظام التكميلي على طول المسار الكلاسيكي وتحلل الخلايا. من بين تفاعلات التحلل المناعي ، غالبًا ما يتم استخدام تفاعل انحلال الدم ونادرًا ما يكون تفاعل تحلل الجراثيم (بشكل رئيسي في التمايز بين الكوليرا والضمات الشبيهة بالكوليرا).

تفاعل انحلال الدم.تحت تأثير التفاعل مع الأجسام المضادة في وجود مكمل ، يتحول تعليق كريات الدم الحمراء إلى اللون الأحمر الفاتح السائل واضح- "ورنيش الدم" بسبب إفراز الهيموجلوبين. عند إعداد تفاعل تشخيصي للتثبيت التكميلي (RCC) ، يتم استخدام تفاعل انحلال الدم كمؤشر: لاختبار وجود أو عدم وجود (ارتباط) المكمل الحر.

تفاعل انحلال الدم الموضعي في مادة هلامية(تفاعل جيرن) هو أحد متغيرات تفاعل انحلال الدم. يسمح لك بتحديد عدد الخلايا المكونة للأجسام المضادة. يتم تحديد عدد الخلايا التي تفرز الأجسام المضادة - الهيموليزين ، من خلال عدد لويحات انحلال الدم التي تظهر في هلام أجار يحتوي على كريات الدم الحمراء ، وهو معلق خلوي للنسيج اللمفاوي المدروس والمكمل.

طريقة المناعي

(RIF ، تفاعل التألق المناعي) - طريقة للكشف عن Ag (Ab) محدد باستخدام Ab (Ag) مترافق مع الفلوروكروم. لديها حساسية وخصوصية عالية. يتم استخدامه لعدوى d-ki السريعة. الأمراض (تحديد العامل المسبب في مادة البحث) ، وكذلك لتحديد الأجسام المضادة والمستقبلات السطحية وعلامات الكريات البيض (التنميط المناعي) والخلايا الأخرى. مباشرة I. م.يتكون من معالجة قسم من الأنسجة أو مسحة من مادة مرضية أو جرثومية إلى خيوط تحتوي على أجسام مضادة محددة مقترنة بالفلوروكروم ؛ يتم غسل الدواء لإزالة الأجسام المضادة غير المقيدة وفحصها تحت المجهر الفلوري. في الحالات الإيجابية ، يظهر مركب مناعي مضيء حول محيط الجسم. التحكم ضروري لاستبعاد التلألؤ غير النوعي. في غير مباشر. معهم.في المرحلة الأولى ، يتم معالجة قسم الأنسجة أو اللطاخة بعامل محدد غير فلوري ، في المرحلة الثانية ، بعامل إنارة ضد -globulins لهذا الحيوان ، والذي تم تطبيقه في المرحلة الأولى. في الحالة الإيجابية ، يتم تكوين مركب مضيء ، يتكون من Ar و Am to it و Am ضد At (طريقة السندويتش). بالإضافة إلى مجهر الإنارة ، لحساب RIF أثناء التنميط الظاهري للخلية ، فارز خلايا الليزر .

التدفق الخلوي- طريقة القياس البصري لمعلمات الخلية وعضياتها والعمليات التي تحدث فيها.

تتمثل هذه التقنية في اكتشاف تشتت الضوء من شعاع الليزر عندما تمر خلية من خلاله في نفاثة سائلة ، ودرجة تشتت الضوء تسمح للشخص بالحصول على فكرة عن حجم الخلية وهيكلها. بالإضافة إلى ذلك ، يأخذ التحليل في الاعتبار مستوى تألق المركبات الكيميائية التي تتكون منها الخلية (التألق الذاتي) أو التي يتم إدخالها في العينة قبل قياس التدفق الخلوي.

المعلق الخلوي ، المسمى سابقًا بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة الفلورية أو الأصباغ الفلورية ، يدخل في تيار السائل الذي يمر عبر خلية التدفق. يتم تحديد الشروط بطريقة تصطف فيها الخلايا واحدة تلو الأخرى بسبب ما يسمى. التركيز الهيدروديناميكي لطائرة نفاثة. في اللحظة التي تعبر فيها الخلية شعاع الليزر ، تسجل الكواشف:

تشتت الضوء بزوايا صغيرة (من 1 درجة إلى 10 درجات) (تستخدم هذه الخاصية لتحديد حجم الخلايا).

تشتت الضوء بزاوية 90 درجة (يسمح لك بالحكم على نسبة النواة / السيتوبلازم ، وكذلك عدم تجانس الخلايا وتفصيلها).

شدة التألق في عدة قنوات مضان (من 2 إلى 18-20) - تسمح لك بتحديد تركيبة السكان الفرعية لتعليق الخلية ، إلخ.

اختبار كومبس

اختبار كومبس المباشر هو اختبار مضاد الجلوبيولين (التراص الهلامي ، والذي يسمح باكتشاف الأجسام المضادة ثنائية التكافؤ الكاملة) ، والذي يحدد الأجسام المضادة من فئة IgG ومكون C3 للمكملات على سطح كريات الدم الحمراء. عادة ، الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر لها خصوصية واسعة لا ترتبط بمستضد راسخ. يشير اختبار كومبس المباشر الإيجابي بوضوح إلى وجود فقر الدم الانحلالي لدى المريض ، على الرغم من عدم إصابة جميع المرضى الذين لديهم اختبار مضاد للجلوبيولين إيجابي مباشر بهذا المرض. ما يقرب من 10 ٪ من المرضى الذين يعانون من الأجسام المضادة أو المكونات المكملة على غشاء كرات الدم الحمراء لا يمكن الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر (اختبار سلبي) ، ولكن مع ذلك ، يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. لتوضيح خصوصية الأجسام المضادة في مثل هذه الحالات ، يتم استخدام الاختبارات مع شطفها. عادة ما يرتبط اختبار كومبس المباشر ، الإيجابي فقط للمكمل ، بأجسام مضادة IgM من النوع البارد. في هذه الحالة ، لا توجد الأجسام المضادة IgM في كريات الدم الحمراء في درجة حرارة الجسم الأساسية. ومع ذلك ، نظرًا لحقيقة أن الأجسام المضادة IgM تعمل بشكل فعال على إصلاح المكمل ، وتبقى مكملة على خلايا الدم الحمراء ، في هذا الشكل من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي (مرض الراصات الباردة) ، سيكون اختبار كومبس إيجابيًا فقط للمكمل.

اختبار كومبس المباشر إيجابي في فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة الدافئة ، وفقر الدم الناتج عن المناعة الذاتية (عند تناول ميثيل دوبا ، يكون رد فعل إيجابي بنسبة 20٪ من المرضى) ، ونوع امتزاز الأدوية من فقر الدم الانحلالي ، ونوع المركب المناعي لفقر الدم الانحلالي ( الاختبار إيجابي فقط لـ C3) ، مع فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة الباردة - مرض الراصات الباردة (الاختبار إيجابي فقط لـ C3). مع بيلة الهيموجلوبين الباردة الانتيابية ، يكون اختبار كومبس المباشر سالبًا.
الخامس فترة حادةالأمراض ، بسبب تدمير كريات الدم الحمراء ، حيث تم تثبيت عدد كبير من الأجسام المضادة ، مع أزمة انحلالي ، وكذلك مع وجود كمية غير كافية من الأجسام المضادة في المسار المزمن للمرض ، يمكن ملاحظة اختبار كومبس المباشر السلبي.

:

• من الشروط المهمة لضمان جودة فحص الدم المختبري أخذ المادة على معدة فارغة ، في الصباح (قبل الساعة 12:00).
• قبل 12 ساعة من الدراسة ، يجب استبعاد الكحول والتدخين والأكل والحد من النشاط البدني.
• في صباح يوم أخذ عينات الدم للبحث ، يمكنك شرب الماء.
• استبعاد الدواء إذا لم يكن من الممكن إلغاء الدواء ، يجب إبلاغ المختبر بذلك.
• من المستحسن أن تأخذ المواد قبل أي تلاعب طبي في التشخيص.
• عند تقييم مستوى الهرمونات عند النساء ، من المهم مراعاة اليوم الدورة الشهريةعندما يكون من الأفضل الكشف عن هرمونات معينة. يمكنك الحصول على هذه المعلومات من طبيبك.

مؤشر	صفة مميزة
نظام المحلل والاختبار	بطاقات هلام DiaMed AG (سويسرا)
القيم المرجعية	نتيجة سلبية / نتيجة إيجابية
العوامل المتداخلة. الأدوية
يمكن إجراء اختبار إيجابي عند تناول الأدوية التالية: أسيتامينوفين ، وحمض الساليسيليك ، وأمينوبيرين ، مضادات الهيستامين، كاربرومال ، سيفالوسبورينات ، كلوربرومازين ، كلوربروباميد ، سيسبلاتين ، كلونيدين ، ديبيرون ، إيثوسوكسيميد ، فينفلورامين ، فوادين ، هيدرالازين ، هيدروكلوروثيازيد ، إيبوبروفين ، أنسولين ، إيزونيازيد ، ليفودوبا ، حمض ميفيناميك ، ميليفالدين ، ميتيرجولين فيناسيتين ، فينيل بوتازون ، بروبينيسيد ، بروكيناميد ، كينيدين ، كينين ، ريفامبين ، ستربتومايسين ، سلفوناميدات ، مشتقات سلفونيل يوريا ، تتراسيكلين ، تريامتيرين ، أنهيدريد ثلاثي
مؤشرات للتعيين
تشخيص فقر الدم الانحلالي المناعي ، مرض الانحلالي لحديثي الولادة ، فقر الدم الانحلالي المناعي الناجم عن الأدوية ، تفاعلات نقل الدم الانحلالي
تفسير النتائج
عادة ، يكون اختبار كومبس المباشر سلبيًا. اختبار إيجابيكومبس في: فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. مرض انحلالي لحديثي الولادة. فقر الدم الانحلالي المناعي المخدرات. تفاعلات نقل الدم الانحلالي