تقنية اختبار كومبس المباشر غير المباشر. اختبار مضاد الجلوبيولين. تفاعل كومبس المباشر وغير المباشر. لتشخيص فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي

اختبار كومبس

اختبار كومبس المباشر هو اختبار مضاد للجلوبيولين (التراص الهلامي ، والذي يسمح باكتشاف الأجسام المضادة ثنائية التكافؤ الكاملة) ، والذي يكتشف الأجسام المضادة من فئة IgG ومكون C3 للمكملات على سطح خلايا الدم الحمراء. عادة ، الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر لها خصوصية واسعة لا ترتبط بمستضد راسخ. يشير اختبار كومبس المباشر الإيجابي بوضوح إلى وجود فقر الدم الانحلالي لدى المريض ، على الرغم من عدم إصابة جميع المرضى الذين لديهم اختبار مضاد للجلوبيولين إيجابي مباشر بهذا المرض. ما يقرب من 10 ٪ من المرضى الذين يعانون من الأجسام المضادة أو المكونات المكملة على غشاء كرات الدم الحمراء لا يمكن الكشف عنها عن طريق اختبار كومبس المباشر (اختبار سلبي) ، ولكن مع ذلك ، يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. لتوضيح خصوصية الأجسام المضادة في مثل هذه الحالات ، يتم استخدام الاختبارات مع شطفها. عادة ما يرتبط اختبار كومبس المباشر ، الإيجابي فقط للمكمل ، بأجسام مضادة IgM من النوع البارد. في هذه الحالة ، لا توجد الأجسام المضادة IgM في كريات الدم الحمراء في درجة حرارة الجسم الأساسية. ومع ذلك ، نظرًا لحقيقة أن الأجسام المضادة IgM تعمل بشكل فعال على إصلاح المكمل ، وتبقى مكملة على خلايا الدم الحمراء ، في هذا الشكل من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي (مرض الراصات الباردة) ، سيكون اختبار كومبس إيجابيًا فقط للمكمل.

اختبار كومبس المباشر إيجابي في فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة الدافئة ، وفقر الدم الناتج عن المناعة الذاتية (عند تناول ميثيل دوبا ، يكون رد فعل إيجابي بنسبة 20٪ من المرضى) ، ونوع امتزاز الأدوية من فقر الدم الانحلالي ، ونوع المركب المناعي لفقر الدم الانحلالي ( الاختبار إيجابي فقط لـ C3) ، مع فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن الأجسام المضادة الباردة - مرض الراصات الباردة (الاختبار إيجابي فقط لـ C3). مع بيلة الهيموجلوبين الباردة الانتيابية ، يكون اختبار كومبس المباشر سالبًا.
الخامس فترة حادةالأمراض ، بسبب تدمير كريات الدم الحمراء ، حيث تم تثبيت عدد كبير من الأجسام المضادة ، مع أزمة انحلالي ، وكذلك مع وجود كمية غير كافية من الأجسام المضادة في المسار المزمن للمرض ، يمكن ملاحظة اختبار كومبس المباشر السلبي.

:

• من الشروط المهمة لضمان جودة فحص الدم المختبري أخذ المادة على معدة فارغة ، في الصباح (قبل الساعة 12:00).
• قبل 12 ساعة من الدراسة ، يجب استبعاد الكحول والتدخين والأكل والحد من النشاط البدني.
• في صباح يوم أخذ عينات الدم للبحث ، يمكنك شرب الماء.
• استبعاد الدواء إذا لم يكن من الممكن إلغاء الدواء ، يجب إبلاغ المختبر بذلك.
• من المستحسن أن تأخذ المواد قبل أي تلاعب طبي في التشخيص.
• عند تقييم مستوى الهرمونات عند النساء ، من المهم مراعاة اليوم الدورة الشهريةعندما يكون من الأفضل الكشف عن هرمونات معينة. يمكنك الحصول على هذه المعلومات من طبيبك.

مؤشر	صفة مميزة
نظام المحلل والاختبار	بطاقات هلام DiaMed AG (سويسرا)
القيم المرجعية	نتيجة سلبية / نتيجة إيجابية
العوامل المتداخلة. الأدوية
يمكن إجراء اختبار إيجابي عند تناول الأدوية التالية: أسيتامينوفين ، وحمض الساليسيليك ، وأمينوبيرين ، مضادات الهيستامين، كاربرومال ، سيفالوسبورينات ، كلوربرومازين ، كلوربروباميد ، سيسبلاتين ، كلونيدين ، ديبيرون ، إيثوسوكسيميد ، فينفلورامين ، فوادين ، هيدرالازين ، هيدروكلوروثيازيد ، إيبوبروفين ، أنسولين ، إيزونيازيد ، ليفودوبا ، حمض ميفيناميك ، ملفيفالدين ، ميتيرجينيد فيناسيتين ، فينيل بوتازون ، بروبينيسيد ، بروكيناميد ، كينيدين ، كينين ، ريفامبين ، ستربتومايسين ، سلفوناميدات ، مشتقات سلفونيل يوريا ، تتراسيكلين ، تريامتيرين ، أنهيدريد ثلاثي
مؤشرات للتعيين
تشخيص فقر الدم الانحلالي المناعي ، مرض الانحلالي لحديثي الولادة ، فقر الدم الانحلالي المناعي الناجم عن الأدوية ، تفاعلات نقل الدم الانحلالي
تفسير النتائج
عادة ، يكون اختبار كومبس المباشر سلبيًا. اختبار كومبس الإيجابي لـ: فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي. مرض انحلالي لحديثي الولادة. فقر الدم الانحلالي المناعي المخدرات. تفاعلات نقل الدم الانحلالي

تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة لمضاد Rhesus (تفاعل كومبس غير المباشر)يتقدمفي المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى ، تم العثور على الأجسام المضادة لمضاد Rhesus ، وهي غير مكتملة ، أحادية التكافؤ. تتفاعل على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء إيجابية عامل الريس ، ولكنها لا تسبب تراصها. يتم تحديد وجود مثل هذه الأجسام المضادة غير المكتملة في تفاعل كومبس غير المباشر. للقيام بذلك ، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (الأجسام المضادة ضد الغلوبولين المناعي البشري) إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الموجبة للعامل الريصي ، والتي تسبب تراص كريات الدم الحمراء. باستخدام تفاعل كومبس ، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بالتحلل داخل الأوعية الدموية للكريات الحمراء ذات الأصل المناعي ، على سبيل المثال ، مرض الانحلالي عند الوليد: تتحد كريات الدم الحمراء لجنين موجب عامل الريسوس مع الأجسام المضادة غير المكتملة لعامل الريزوس المنتشر في الدم ، والذي يعبر المشيمة من أم سلبي عامل ريسس.

آلية. ترجع الصعوبة في اكتشاف الأجسام المضادة غير الكاملة (أحادية التكافؤ) إلى حقيقة أن هذه الأجسام المضادة ، عند الارتباط بحلقات مستضد معين ، لا تشكل بنية شبكية ، ولا يتم اكتشاف التفاعل بين المستضدات والأجسام المضادة عن طريق التراص أو الترسيب أو اختبارات أخرى. لتحديد معقدات الجسم المضاد المستضد المتكونة ، يجب استخدام أنظمة اختبار إضافية. للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة ، على سبيل المثال ، إلى مستضد Rh لخلايا الدم الحمراء في مصل دم المرأة الحامل ، يتم إجراء التفاعل على مرحلتين: 1) تضاف كريات الدم الحمراء التي تحتوي على مستضد Rh إلى تخفيفين من مصل الاختبار وحفظها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة ؛ 2) إلى كريات الدم الحمراء بعد غسلها جيدًا بعد المرحلة الأولى ، أضف مصل مضاد الجلوبيولين المضاد للإنسان للأرنب (في تخفيف عمل مُعاير مسبقًا). بعد الحضانة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، يتم تقييم النتائج من خلال وجود التراص الدموي (تفاعل إيجابي). من الضروري التحكم في مكونات التفاعل: 1) مصل مضاد للجلوبيولين + كريات الدم الحمراء حساسة بشكل واضح بأجسام مضادة محددة ؛ 2) كريات الدم الحمراء تعامل بمصل طبيعي + مصل مضاد للجلوبيولين ؛ 3) كريات الدم الحمراء سلبية العامل الريصي تعامل بمصل الاختبار + مصل مضاد الجلوبيولين.

50. تفاعل التراص الدموي السلبي. آلية. عناصر. طلب.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي)(RNGA ، RPGA)يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء (أو اللاتكس) مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتصة على سطحها ، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة أو مستضدات مصل الدم للمرضى إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها وتسقط في قاع أنبوب أو خلية اختبار على شكل رواسب صدفيّة.

عناصر.لإنتاج RNHA ، يمكن استخدام كريات الدم الحمراء للأغنام والحصان والأرانب والدجاج والفأر والبشر وغيرهم ، والتي يتم حصادها للاستخدام المستقبلي ، ومعالجتها بالفورمالين أو الجلوتارالدهيد. تزداد قدرة امتصاص كريات الدم الحمراء عند معالجتها بمحلول التانين أو كلوريد الكروم.

يمكن أن تعمل مستضدات السكاريد للكائنات الحية الدقيقة ، ومستخلصات اللقاحات البكتيرية ، ومستضدات الفيروسات والريكتسيا ، بالإضافة إلى مواد أخرى كمستضدات في RNGA.

تسمى كريات الدم الحمراء التي يتم تحسسها بواسطة AG باسم تشخيص كرات الدم الحمراء. من أجل تحضير تشخيص كريات الدم الحمراء ، غالبًا ما تستخدم كريات الدم الحمراء ، التي لها نشاط كثيف مرتفع.

طلب. يستخدم RNHA لتشخيص الأمراض المعدية ، وتحديد هرمون موجهة الغدد التناسلية في البول عند حدوث الحمل ، والكشف عن فرط الحساسية للأدوية والهرمونات ، وفي بعض الحالات الأخرى.

آلية. يتميز اختبار التراص الدموي غير المباشر (RIHA) بحساسية وخصوصية أعلى بكثير من اختبار التراص. يتم استخدامه لتحديد العامل الممرض من خلال تركيبه المستضدي أو للإشارة إلى المنتجات البكتيرية - السموم في المادة المرضية المدروسة وتحديدها. وفقًا لذلك ، يتم استخدام التشخيصات القياسية (التجارية) للأجسام المضادة للكريات الحمر ، والتي يتم الحصول عليها عن طريق امتزاز أجسام مضادة محددة على سطح كريات الدم الحمراء المدبوغة (المعالجة بالتانين). يتم تحضير التخفيفات المتسلسلة لمواد الاختبار في آبار الألواح البلاستيكية. ثم يتم إضافة كمية متساوية من معلق بنسبة 3٪ من كريات الدم الحمراء المحملة بالأجسام المضادة إلى كل بئر. إذا لزم الأمر ، يتم وضع التفاعل بالتوازي في عدة صفوف من الآبار مع كريات الدم الحمراء محملة بأجسام مضادة من نوعية مجموعة مختلفة.

بعد ساعتين من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، يتم أخذ النتائج بعين الاعتبار وتقييمها مظهر خارجيرواسب كريات الدم الحمراء (بدون اهتزاز): مع تفاعل سلبي ، يظهر راسب على شكل قرص مضغوط أو حلقة في قاع البئر ، مع رد فعل إيجابي ، رواسب كريات الدم الحمراء المميزة ، فيلم رقيق ذو حواف غير متساوية.

تفاعل كومبس - طريقة فعالةالكشف عن مستضدات كرات الدم الحمراء والأجسام المضادة للكريات الحمراء في دم الإنسان في اختبار تراص غير مباشر. أساس الاختبار هو استخدام كواشف وحيدة النسيلة تعتمد على الغلوبولين المناعي من الفئة G (IgG) لكتابة مستضدات كريات الدم الحمراء ، يليها استخدام مصل مضاد للجلوبيولين كومبس (AGS) في المرحلة الثانية.

يتم إنتاج AGS عن طريق خلط مصل الدم من حيوانات المختبر المحصنة مع الغلوبولين المناعي البشري من الفئة G والأجسام المضادة وحيدة النسيلة إلى أحد المكونات - مكمل C3D المصل البشري. يسبب AGS تراص كريات الدم الحمراء المحسوسة بأجسام مضادة معينة. في غياب الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء تحت تأثير AGS ، لا يحدث رد فعل إيجابي.

يسمح لك تفاعل كومبس غير المباشر بتحديد وجود:

• مستضدات كرات الدم الحمراء المكتشفة بواسطة كواشف IgG (أجسام مضادة "غير كاملة" ، على سبيل المثال ، الكواشف أحادية النسيلة anti-D ، و anti-F Y a ، و anti-F Y b) ؛
• الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء من فئة IgG.

اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر: الكشف عن مستضدات كرات الدم الحمراء

نقدم طريقة تفاعل كومبس غير المباشر باستخدام مضاد D IgG coliclon كمثال.

1. ضع علامة على أنبوب نظيف: حدد اسم الشخص الذي يجري اختباره.
2. قم بتوزيع قطرتين (حوالي 0.1 مل) من مضاد D IgG zoliclone في الأنبوب.
3. أضف قطرتين من محلول معلق بنسبة 5٪ من كريات الدم الحمراء التي تم تحليلها وغسلها مسبقًا بمحلول ملحي. خلط عينات الاختبار مع Zoliclone.
4. احتضان الخليط في حمام مائي أو في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
5. أضف 5-10 مل من المحلول الملحي لأنبوب الاختبار باستخدام ماصة باستور.
6. أنبوب الطرد المركزي مع تسارع طرد مركزي 1200 جم عند درجة حرارة 18-25 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة.
7. قم بإزالة المحلول الملحي.
8. كرر غسل كريات الدم الحمراء بالطرد المركزي 2-3 مرات.
9. أضف قطرتين من مصل مضاد الجلوبيولين إلى حبيبات خلايا الدم واخلطها.
10. أنبوب طرد مركزي مع تسارع طرد مركزي 1200 جرام لمدة دقيقة عند درجة حرارة 18 - 25 درجة مئوية.
11. أضف 3-5 قطرات من محلول ملحي باستخدام موزع أو ماصة باستور.
12. إعادة تعليق الحبيبات وتقييم بصري للتراص. يشير التراص المعبر في قاع الأنبوب على خلفية محلول واضح إلى اكتشاف مستضد كرات الدم الحمراء. يشير التعليق المعتم لخلايا الدم إلى عدم وجود مستضد.

تفاعل كومبس: فحص الأجسام المضادة المناعية لخلايا الدم الحمراء

أجريت الدراسة كجزء من اختبار التوافق الفردي لجميع مستضدات كريات الدم الحمراء في المتبرع والمتلقي. الاستنتاج حول التوافق الكامل لمصل المتلقي مع كريات الدم الحمراء للمتبرع يتم على أساس عدم وجود انحلال الدم و / أو التراص في جميع مراحل التحليل. تشير علامات انحلال الدم و / أو التراص في أي مرحلة من مراحل الاختبار إلى عدم توافق عينات الدم.

تقييم التوافق وفقًا لنظام AB0 ، والكشف عن الأجسام المضادة "الباردة"

1. تحضير عينة دم من متبرع:
   • ضع 0.2 مل من الدم في أنبوب الاختبار باستخدام موزع أوتوماتيكي ؛
   • اغسل كريات الدم الحمراء 3 مرات في 5.0 مل من محلول ملحي ؛
   • resuspend الكرية في 3-4 مل من محلول LISS منخفض القوة الأيونية.
2. قم بتسمية الأنبوب النظيف الثاني: حدد اسم المتلقي واسم المتبرع.
3. قم بتوزيع 0.1 مل من مصل المستلم في الأنبوب المسمى باستخدام موزع أوتوماتيكي.
4. أضف قطرتين من محلول LISS 5٪ من كريات الدم الحمراء.
5. قم بالطرد المركزي للخليط فورًا مع تسارع طرد مركزي يبلغ 1200 جم عند درجة حرارة تتراوح من 18 إلى 25 درجة مئوية لمدة 15 - 20 ثانية.
6. قم بهز الأنبوب قليلاً لفصل الرواسب عن القاع. تقييم لوجود التراص. يعني وجود انحلال الدم و / أو التراص:
   • عدم التوافق وفقًا لنظام AB0 ؛
   • وجود أجسام مضادة "باردة" من فئة IgM أو IgA في مصل المريض ، وليست خاصة بمستضدات AB0.

الكشف عن الأجسام المضادة "الحرارية"

1. في حالة عدم وجود انحلال دم و / أو تراص ، احتضان الأنبوب لمدة 10-15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
2. الطرد المركزي الأنبوب عند 1200 جم لمدة 15 - 20 ثانية في درجة حرارة الغرفة.
3. قم بهز الأنبوب وتحقق من انحلال الدم و / أو التراص في المادة الطافية. تشير النتيجة الإيجابية إلى الكشف في مصل المريض عن الأجسام المضادة IgM "الحرارية" ضد مستضدات كرات الدم الحمراء للمتبرع.

الكشف عن الأجسام المضادة IgG في اختبار كومبس

1. إذا كانت النتيجة سلبية في المرحلة الأخيرة من الدراسة ، أضف 5 مل من محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9٪ إلى أنبوب الاختبار باستخدام ماصة باستور.
2. الطرد المركزي الأنبوب عند 1200 جم لمدة 15 - 20 ثانية عند درجة حرارة هواء من 18 - 25 درجة مئوية. تجاهل بعناية المادة طافية باستخدام ماصة باستور.
3. كرر غسل RBC 2 إلى 3 مرات أخرى.
4. أضف 1-2 قطرات من مصل مضاد الجلوبيولين إلى أنبوب الاختبار. قم بإجراء خلط دقيق.
5. الطرد المركزي الأنبوب بجرعة 1200 جم لمدة 15 - 20 ثانية.
6. قم بتفتيت رواسب كرات الدم الحمراء بعناية وتقييم نتيجة التفاعل بصريًا. الكشف عن التراص يعني وجود أجسام مضادة IgG في مصل المريض ضد مستضدات كريات الدم الحمراء للمتبرع.

أو مذاب في البلازما.

المرادفات: اختبار مضاد الغلوبولين ، اختبار كومبس ، AGT ، اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر / المباشر ، IAT ، NAT ، DAT ، اختبار كومبس غير المباشر / المباشر

اختبار كومبس هو

تحليل يكتشف التحصين والأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء.

أنواع اختبار كومبس

• اختبار كومبس المباشر- يكتشف الأجسام المضادة المثبتة على سطح كريات الدم الحمراء. يتم إجراؤه للاشتباه في الإصابة بفقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي ، وانحلال الدم في أمراض المناعة الذاتية ، بعد تناول الأدوية (ميثيل دوبا ، البنسلين ، الكينين) ، بعد نقل الدم ومرض الانحلالي لحديثي الولادة.

تم تحسس كريات الدم الحمراء في الجسم الحي - ترتبط الأجسام المضادة بها بقوة بالفعل ، وإضافة مصل مضاد الجلوبيولين (مضاد IgG) يتسبب في التصاق الخلايا الحساسة ببعضها البعض ، وهو ما يمكن رؤيته بالعين المجردة.

• اختبار كومبس غير المباشر- يكتشف الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء في بلازما الدم ، والتي يتم إجراؤها قبل نقل الدم وأثناء الحمل.

الأجسام المضادة هي نوع من الأجسام المضادة الذاتية ، أي الأجسام المضادة ضد أنسجتها. يحدث الجسم المضاد الذاتي عندما يتفاعل الجهاز المناعي بشكل غير طبيعي مع بعض الأدوية ، مثل الجرعات العالية من البنسلين.

تحتوي كريات الدم الحمراء الموجودة على سطحها على تراكيب كيميائية مختلفة (جليكوليبيدات ، سكريات ، بروتينات سكرية وبروتينات) ، في الطب يشار إليها باسم المستضدات. يرث الشخص من والديه خريطة معينة من المستضدات على كل خلية دم حمراء.

يتم دمج المستضدات في مجموعات وبجانب ذلك ، يتم تقسيم الدم إلى عدة مجموعات - وفقًا لـ نظام AB0 ، Rh ، Kell ، Lewis ، Kidd ، Duffy. أشهرها وأهمها في عمل الطبيب هما AB0 و Rh (Rh).

نظام AB0

الانتماء الريسوسييتم تحديد الشخص من خلال وجود هذه المستضدات. مستضد كريات الدم الحمراء ذو ​​أهمية خاصة هو مستضد D. إذا كان موجودًا ، فإنهم يتحدثون عن Rh-إيجابي في الدم ، وإذا لم يكن موجودًا ، يتحدثون عن Rhd سلبي.

إذا انضم الجسم المضاد المقابل إلى مستضدات كريات الدم الحمراء ، فسيتم تدمير كريات الدم الحمراء - الدم.

مؤشرات لتنفيذ اختبار مضاد الجلوبيولين المباشر

• فقر الدم الانحلالي الأولي المناعي الذاتي
• فقر الدم الانحلالي في أمراض المناعة الذاتية والأورام والمعدية
• فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي الناجم عن المخدرات
• فقر الدم الانحلالي بعد نقل الدم (أيام - شهور)
• مرض انحلالي لحديثي الولادة (عدم التوافق في إحدى فصائل الدم)

مؤشرات لتنفيذ اختبار مضاد الغلوبولين غير المباشر

• قبل نقل الدم
• أثناء الحمل لامرأة سلبية عامل ريزوس

فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية

فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية (أولي)هو مرض مناعي ذاتي تقليدي لأسباب غير معروفة. افترض وجود انتهاك في عملية التفاعل على مستوى الجهاز المناعي ، مما يؤدي إلى تصور كريات الدم الحمراء على أنها غريبة. تنتج الخلايا أجسامًا مضادة من فئة IgG (تتفاعل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية) و / أو IgM (عند درجة حرارة 40 درجة مئوية) ، وتلتصق بسطح كريات الدم الحمراء ، وتبدأ عددًا من الإنزيمات (نظام مكمل) و "تثقب" جدار كرات الدم الحمراء مما يؤدي إلى تدميرها - انحلال الدم.

أعراض فقر الدم الانحلالي

• التعب والضعف العام والتهيج
• ضيق التنفس
• آلام في البطن وغثيان
• لون البول غامق
• ألم في الظهر
• تلوين إيقاعي للجلد والأغشية المخاطية
• تضخم الكبد والطحال
• انخفاض في عدد خلايا الدم الحمراء والهيموجلوبين في فحص الدم العام

نتيجة ايجابية مستقيم اختبار كومبس 100٪ يؤكد تشخيص فقر الدم الانحلالي بالمناعة الذاتية ، مما يثبت مصدره من المناعة الذاتية. في الوقت نفسه ، لا تجعل النتيجة السلبية من الممكن إجراء التشخيص.

يمكن أن يكون فقر الدم الانحلالي الثانوي للمناعة الذاتية واختبار كومبس الإيجابي مع الأمراض التالية:

• الذئبة الحمامية الجهازية
• متلازمة إيفانز
• غلوبولين الدم في والدنستروم
• بيلة الهيموغلوبينية الباردة الانتيابية
• سرطان الدم الليمفاوي المزمن
• الأورام اللمفاوية
• عدد كريات الدم البيضاء المعدية
• عدوى الميكوبلازما الرئوية
• مرض الزهري

إن إيجابية اختبار مضاد الجلوبيولين في هذه الأمراض لا تستخدم كمعيار تشخيصي ، بل هي أحد أعراض المرض.

مرض انحلالي حديثي الولادة

سبب مرض انحلالي لحديثي الولادةعدم توافق فصائل الدم في الأم والجنين ، في معظم الحالات وفقًا لنظام Rh ، في حالات فردية - وفقًا لنظام AB0 ، بشكل عرضي - وفقًا لمولدات المضادات الأخرى.

يتطور تضارب العامل الريصي إذا كان جنين المرأة سلبية العامل الريصي قد ورث دمًا إيجابيًا من الأب.

يتطور المرض عند الوليد فقط إذا كانت الأم قد طورت بالفعل أجسامًا مضادة للمستضدات المقابلة ، والتي تحدث بعد حالات الحمل السابقة والولادة والإجهاض وعمليات نقل الدم غير المتوافق. السبب الأكثر شيوعًا لتحفيز تخليق الأجسام المضادة لمستضدات غشاء كرات الدم الحمراء هو الولادة (نزيف الجنين والأم). تمر الولادات الأولى في الغالب دون مضاعفات ، لكن الولادات التالية محفوفة بمرض الانحلالي عند الوليد في الأيام الأولى بعد الولادة.

أعراض مرض الانحلالي عند الوليد

• اصفرار الجلد
• فقر دم
• شحوب الجلد والأغشية المخاطية
• تضخم الكبد والطحال
• اضطرابات في الجهاز التنفسي
• انتفاخ الجسم كله
• الإثارة والاكتئاب التدريجي للجهاز العصبي المركزي

فقر الدم بعد نقل الدم

اختبار كومبس غير المباشرأجريت قبل نقل الدم لتقييم التوافق ، و اختبار كومبس المباشر- بعد ذلك ، في حالة الاشتباه في حدوث انحلال دم بعد نقل الدم ، أي إذا كنت تعاني من أعراض مثل الحمى والقشعريرة والري (اقرأ أدناه). الغرض من الاختبار هو الكشف عن الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء المنقولة التي ارتبطت بكرات الدم الحمراء للمتلقي وهي سبب انحلال الدم بعد نقل الدم ، وكذلك الإزالة المبكرة لكرات الدم الحمراء من الدورة الدموية للمتلقي (المتلقي).

أعراض رد الفعل الانحلالي بعد نقل الدم

• زيادة في درجة حرارة الجسم
• طفح جلدي على الجلد
• ألم في الظهر
• لون البول الأحمر
• غثيان
• دوخة

فك رموز اختبار كومبس

تجدر الإشارة إلى أن القواعد الأساسية لفك تشفير اختبارات مضادات الغلوبولين المباشرة وغير المباشرة هي نفسها. الاختلاف الوحيد هو موقع الأجسام المضادة - في الدم أو بالفعل على خلايا الدم الحمراء - في كريات الدم الحمراء.

• إذا اختبار كومبس المباشر سلبي- هذا يعني أن الجسم المضاد لا "يجلس" على كريات الدم الحمراء ويجب البحث عن سبب الأعراض أكثر ويجب إجراء اختبار كومبس غير المباشر
• إذا تم الكشف عن نتيجة إيجابية لاختبار كومبس بعد نقل الدم ، والالتهابات ، والأدوية - يمكن أن تستمر الإيجابية لمدة تصل إلى 3 أشهر (عمر كريات الدم الحمراء 120 يومًا - 3 أشهر)
• يؤدي اختبار مضاد الغلوبولين الإيجابي إلى مرض مناعي ذاتي يمكن أن يستمر لأشهر أو حتى سنوات

معايير اختبار كومبس

• اختبار كومبس المباشر- نفي
• اختبار كومبس غير المباشر- نفي

من الناحية النوعية ، يتم قياس النتيجة الإيجابية في عدد الإيجابيات من واحد إلى أربعة (+ ، ++ ، +++ ، ++++) ، وكميًا في شكل رقمي - 1:16 ، 1: 256 ، إلخ.

4 حقائق عن اختبار كومبس

• تم اقتراحه لأول مرة في كامبريدج عام 1945
• عتبة الحساسية - ما لا يقل عن 300 جزيء ثابت من الجسم المضاد في خلية حمراء واحدة
• عدد الأجسام المضادة التي تسبب انحلال الدم - بشكل فردي لكل شخص (من 16-30 إلى 300)
• قد يتم تطبيع ديناميكيات المؤشرات المختبرية الأخرى لفقر الدم الانحلالي (الهيموغلوبين ، والبيليروبين ، والخلايا الشبكية) ، وسيظل اختبار كومبس على نفس المستوى

عيوب اختبار مضاد الجلوبيولين

• لا يمكن تحديد قوة الارتباط لمولد الضد بجسم مضاد
• عدد غير معروف من الأجسام المضادة المرتبطة
• لا يحدد نوع الجسم المضاد
• لن يساعد اختبار كومبس الإيجابي في تحديد السبب
• 0,5% الأشخاص الأصحاءيملك عينة إيجابيةكومبس بدون أي دليل على فقر الدم الانحلالي
• غير مناسب لمراقبة نجاح العلاج ، لأنه لا يشير إلى نشاط انحلال الدم في كريات الدم الحمراء

مبدأ مضاد الجلوبيولين. يمكن اكتشاف الأجسام المضادة الجزئية لكريات الدم الحمراء والجزيئات التكميلية (C) الموجودة على سطح كريات الدم الحمراء - اختبار مباشر - عن طريق تراصها عند ملامستها لمصل حيواني يحتوي على أجسام مضادة لمضاد الغلوبولين البشري (مصل مضاد الجلوبيولين). يتم الكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة الخالية في المصل - اختبار غير مباشر - عن طريق ربطها بمزيج من مجموعة كريات الدم الحمراء من المجموعة الطبيعية 0 ، وجميع المستضدات منها تنتمي إلى نظام Rh معروف ، ثم تلتصق تحت تأثير مصل مضاد الجلوبيولين.

المواد والكواشف لاختبار كومبس المضاد الغلوبولين: أنابيب 10/100 مل. ماصات متدرجة لـ 1.2 مل ؛ ماصات باستير حوامل. موضوع النظارات غير المصقولة. 8.5 ‰ محلول كلوريد الصوديوم ؛ كريات الدم الحمراء. سيتم الحصول على كريات الدم الحمراء للمريض ، وكذلك أولئك الذين ينتمون إلى المجموعة 0 ، من الدم المأخوذ حديثًا على مادة مضادة للتخثر (محلول EDTA).

اختر المجموعة 0 كريات الدم الحمراء بحيث تأتي من أفراد عاديين وتحتوي على الكل مستضدات نظام Rh. يمكن تخزينها حتى 7 أيام في البلازما الذاتية عند +4 درجة مئوية. في حالة عدم وجود مجموعة 0 كريات الدم الحمراء ، فسيفساء مستضدية معروفة ، يمكن استخدام مزيج من كريات الدم الحمراء المجموعة 0 ، كريات الدم الحمراء الإيجابية والسلبية Rh.

مصليجب اختيار المريض حديثًا.

مصل مضاد الجلوبيولينمن إنتاج المعهد. د. آي كانتاكوزينو ، متوفر في صورة مجففة بالتجميد في أمبولات تحتوي على 1 مل. بعد الذوبان ، يجب تخزين المصل عند -20 درجة مئوية.

تقنية اختبار كومبس المضاد للجلوبيولين:
أ) اختبار كومبس المباشر: اغسل كريات الدم الحمراء للمريض 3 مرات بمحلول 8.5 ‰ كلوريد الصوديوم.
ضع قطرة كبيرة من مخففات مصل مضاد الغلوبولين على عدة شرائح ، وقطرة صغيرة بجانبها من رواسب كريات الدم الحمراء ؛ تقلب قطرات من زاوية زجاجية. اترك المادة المحضرة على المنضدة لمدة 5 دقائق ، ثم افحصها بحثًا عن وجود تراص. إذا كانت موجبة ، حدد أقصى عيار التراص.

ب) اختبار كومبس غير المباشر: كريات الدم الحمراء من المجموعة 0 ، Rh-positive و Rh-negative ، تغسل 3 مرات بمحلول 8.5 ‰ NaCl وتعريضه لمصل المريض بمعدل قطرتين من كريات الدم الحمراء لكل 8-10 قطرات من المصل ، ثم لمدة 60 دقيقة ، احتضان عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، اغسل كريات الدم الحمراء مرة أخرى ثلاث مرات واعمل عليها بمصل مضاد الجلوبيولين ، وفقًا لتعليمات اختبار كومبس المباشر.

متى سيأتي حول الأجسام المضادة النشطة الباردةتوعية كريات الدم الحمراء للمجموعة 0 لقضاء 60 دقيقة. عند درجة حرارة +4 درجة مئوية.

ملحوظة: 1) لا تقم بإجراء اختبار كومبس المباشر على كريات الدم الحمراء المخزنة لمدة يوم أو أكثر عند درجة حرارة +4 درجة مئوية أو درجة حرارة الغرفة ، حيث قد تكون النتائج إيجابية كاذبة بسبب تثبيت الأجسام المضادة غير المكتملة والفاعلة الباردة الموجودة في المصل الطبيعي. 2) في حالات فرط بروتين الدم الشديد ، اغسل كريات الدم الحمراء 4-5 مرات وتحقق من عدم وجود بروتينات المصل في سائل الغسيل الأخير باستخدام حمض السلفوساليسيليك.

قد يكون هناك بقايا محتملة مقدارها 2 ميكروجرام IgG / مل في رواسب كرات الدم الحمراء تحييد مصل مضاد الجلوبيولين. يمكن أيضًا إجراء اختبار كومبس باستخدام مصل مضاد IgG و -IgM و -IgA -C3 و -C4 أحادي النوعية من أجل توضيح نوع الجلوبولين الموجود على سطح كريات الدم الحمراء ، على سبيل المثال ، في أولئك الذين يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي.